Parámetros óptimos para estandarizar un Elisa tipo sandwich con anticuerpos monoclonales para el diagnóstico de neurocisticercosis humana en muestras de orina.

Abstract

La neurocisticercosis humana (NCC) es una infección causada por el cisticerco de T. solium, afecta principalmente al cerebro, causando mayormente epilepsia en los países en desarrollo y siendo un problema de salud pública. Se han implementado y adaptado una variedad de técnicas serológicas para el mejoramiento del diagnóstico y estudio de esta parasitosis; sin embargo, son pocos los estudios con manejo de anticuerpos monoclonales en el desarrollo de las mismas. El objetivo del presente estudio fue determinar parámetros óptimos para estandarizar un ELISA tipo sándwich empleando anticuerpos monoclonales anti T. solium en muestras de orina. Se realizó satisfactoriamente la biotinilación de los 4 mAbs (TsW5, TsW7, TsW8 y TsW11), en la selección simultanea de placas se determinó la Immulón 4HBX y en solución bloqueante con leche Carnation al 2% obtuvieron el mejor ratio 23.6. En la evaluación de buffer de adherencia se seleccionó el buffer Phosphate buffered saline Dulbecco – PBS pH 7.2(Oxoid), determinando la concentración óptima para el mejor par de mAbs para la detección de antígeno, resultando como anticuerpo de captura el TsW8 (4ug/ml) y como anticuerpo de detección biotinilado el TsW5 (4ug/ml), en la selección de sustrato, presento mayor ratio 64 el O- Phenylene diamine dihydro – Chloride (OPD); con el tiempo de incubación de 15 min para finalmente agregar la solución de parada (H2SO4 2N). Todas las evaluaciones se realizaron con muestras control de orina positivo y negativo y la reactividad se expresó en ratio (positivo OD / negativo OD). Los parámetros óptimos para el ELISA tipo sándwich diseñado muestra la utilidad potencial para el diagnóstico y puede ser útil para la monitorización posterior al tratamiento de pacientes con infecciones viables de NCC.