DNA extraction from samples fixed on slides for molecular detection of Mycobacterium Leprae Lima, 2023
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Resumen
Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae. In Peru, the standard laboratory diagnosis is bacilloscopy from smear-fixed samples. In recent years, other countries have started using PCR testing as an alternative for diagnosis due to its high sensitivity. Objective: To extract DNA from smear-fixed samples for molecular detection of Mycobacterium leprae. Methodology: The study included 50 samples from skin incision scrapings fixed on glass slides (30 samples with positive bacilloscopy and 20 samples with negative bacilloscopy). DNA was extracted using a silica column and the 16S rRNA sequence was amplified by real-time PCR (qPCR). Results: The quality of the extracted DNA ranged from low to good, which did not affect amplification through qPCR. DNA concentrations ranged from 0.5 ng/mL to 67.2 ng/mL. qPCR results showed 100% categorical agreement for the 30 positive samples and 40% disagreement for the 20 negative samples. Conclusion: Good results were obtained from DNA extraction of Mycobacterium leprae from smear-fixed skin incision scraping samples.
Resumen
Antecedentes: La lepra es una enfermedad infecciosa causada por Mycobacterium leprae. En Perú, el diagnóstico de laboratorio estándar es la baciloscopia a partir de muestras fijadas en láminas. En los últimos años, en otros países se viene utilizando la prueba de PCR como alternativa para el diagnóstico debido a alta sensibilidad. Objetivo: Extraer ADN a partir de muestras fijadas en láminas para la detección molecular de Mycobacterium leprae. Metodología: Se incluyeron en el estudio 50 muestras por raspado de incisión cutánea fijadas en lámina portaobjeto (30 muestras con baciloscopia positiva y 20 muestras con baciloscopia negativa). Se extrajo ADN por columna de sílica y se amplificó la secuencia 16S rRNA mediante PCR en tiempo real (qPCR). Resultados: La calidad del ADN extraído fue entre baja y buena calidad, los cuales no afectaron la amplificación mediante qPCR. Las concentraciones de ADN presentaron desde 0.5 ng/mL hasta 67.2 ng/mL. Los resultados de la qPCR presentaron un 100% de concordancia categórica para las 30 muestras positivas, 40% de disconcordancia para las 20 muestras negativas. Conclusión: Se obtuvo buenos resultados a partir de la extracción de ADN de Mycobacterium leprae a partir de muestras por raspado de incisión cutánea fijadas en láminas.